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在液相色譜實驗中,C18色譜柱是常見的一種反相色譜柱。以下是對該柱子進行活化和維護的方法:
防脫殼處理:將新柱浸入純甲醇或乙腈溶液中,旋轉(zhuǎn)或以其它方式使其表面完·全接觸至少30分鐘。洗去大部分殘留有機物之后,用純水或75%甲醇或乙腈沖洗2-3次直到輸出液為無色無味水平。
酸堿洗處理:在防脫殼處理完成后,使用0.1-1%的醋酸溶液滴于色譜柱表面并停留約30分鐘,并徹·底用DI水沖洗干凈。然后采用0.1-1%的氨水溶液吸附含氨基的樣品于柱子上并停留約30分鐘,Z后再次用DI水推出至輸出穩(wěn)定后即可。
有機物處理:加入摩爾比1:1的異丙醇和甲酸制成的混合液進柱子中,在流速為0.5 mL/min的條件下梯度洗脫(10% B, 3min; 40% B, 3min; 95% B, 3min,重置至10%過渡三分鐘),使其開放性自由膠體的更快恢復。
注意,活化步驟而區(qū)地直到輸出液為無色無味水平,這一點比較關鍵。如果您在某些步驟中出現(xiàn)了問題,例如未完·全去除殘留有機物、洗滌溶劑未嚴格控制等,可能會影響到Z終結(jié)果。因此,對于分析靈敏性和分辨率較高的分析,請盡可能保持每個步驟的準確性和一致性。
保持潔凈:用高純度水、其他常見的有機溶劑進行沖洗,去除表面殘留樣品、鹽和溶液等物質(zhì)。
防止干燥:建議如果長期不使用反相色譜柱,注滿一定比例的溶劑并密封。
正確使用:使用時應避免太高或太低的流量,以及過強的壓力。不使用時封住兩端,避免雜質(zhì)進入。
記得,C18色譜柱的使用壽命大約為100~200次,當輸出結(jié)果的峰形變得模糊、輸出穩(wěn)定性下降時,請及時更換新柱。
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